Электронная микроскопия
Электронная микроскопия позволяет оценивать топографию образцов, визуализировать внутриклеточные структуры с нанометровым разрешением, определять внутриклеточные мишени воздействия различных веществ по изменению морфологии органелл. В отличие от флуоресцентной микроскопии позволяет получать изображение одновременно всех мембранных структур клетки.
Зарекомендовавшая себя классика
Направления электронной микроскопии
Сканирующая электронная микроскопия
Главным преимуществом данного метода микроскопии является детальное изучение уникальной топографии образцов после их полного обезвоживания на этапе пробоподготовки. Получаемые трехмерные изображения поверхности образцов впечатляют наглядностью, легкостью интерпретации и идентификации отдельных структурных компонентов.
Иммуно-электронная микроскопия
Благодаря использованию данного метода можно локализовать искомый белок среди всех мембранных структур внутри клетки. Для данного исследования необходима собственная закупка первичных антител.
Энерго-дисперсионный анализ
Данный метод позволяет определить элементный состав поверхности образца, что даёт возможность предположить наличие определенного вещества.
Этапы
в комплексе или по отдельности
Подготовка образцов
Заключается в химической фиксации, которая может быть выполнена как в вашей лаборатории, так и на базе центра.
Получение ультратонких срезов
Получение изображений на просвечивающем электронном микроскопе
Получение полноценной информации о всех мембранных структурах клеток, иммуннолокализации белков в одиночном срезе или при серийной сьемке в реконструированной трехмерной модели.
для сканирующего электронного микроскопа
Предоставление образца
для исследования методом сканирующей электронной микроскопии подходят любые объекты с интересующими исследователя деталями внешнего вида, архитектоникой поверхности и топографией отдельных структурных элементов.
Обезвоживание
Необходимо для удаление излишек воды и жира из ткани и т.п. Невозможно изучение «влажных» образцов и внутриклеточных структур, прижизненная визуализация
Получение изображений интересующей области
Позволяет обнаружить нанометровые структуры поверхности клетки/организма
дополнительная информация по вашему образцу возможна с методом
Трехмерная реконструкция
По серийным ультратонким срезам с помощью различного ПО осуществляется трехмерная реконструкция
Подготовка образца
Подготовка образцов выполняется с использованием классической подготовки к просвечивающей электронной микроскопии, с одним ограничением — необходима самая твердая смола или для сканирующей электронной микроскопии — block-face метод.
Ультратонкие срезы
Ультратонкие срезы нарезаются сериями и далее контрастируются.
Просмотр на микроскопе
В зависимости от задачи используется либо сканирующий электронный микроскоп либо просвечивающий электронный микроскоп.
Реконструкция структур
Реконструкция позволяет оценить объём клеток, количество и распределение органелл, плотность на единицу объёма.
